維生素D是人類必需的一種脂溶性維生素，核心功能在于調(diào)節(jié)鈣磷代謝，對(duì)維持骨骼、神經(jīng)和肌肉系統(tǒng)的正常運(yùn)作至關(guān)重要。此外，它還參與組織細(xì)胞的分化、增殖以及免疫調(diào)節(jié)過程。
  臨床常用的維生素D及其結(jié)構(gòu)類似物包括：維生素D2、維生素D3、骨化二醇、骨化三醇、阿法骨化醇、帕立骨化醇、卡泊三醇等。
  維生素D結(jié)構(gòu)類似物的生物分析面臨顯著挑戰(zhàn)。部分原因是某些類似物（如骨化三醇）是內(nèi)源性物質(zhì)，在人體血漿中天然存在，但其濃度極低（pg級(jí)）。如此微量的目標(biāo)物，加之其他維生素D代謝物可能造成的干擾，使得準(zhǔn)確測(cè)定這些化合物變得十分困難。
  分析方法的難點(diǎn)
  1)靈敏度挑戰(zhàn)
  前處理復(fù)雜：為達(dá)到極低定量下限（pg級(jí)），常需較大血漿樣本量（0.3~0.5 mL）。目標(biāo)化合物的強(qiáng)脂溶性導(dǎo)致僅靠簡(jiǎn)單蛋白沉淀難以有效純化，會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重基質(zhì)效應(yīng)。需采用液液萃?。↙LE）、固相萃?。⊿PE）、蛋白沉淀后吹干再衍生化或其組合等前處理策略。
  離子化效率低：強(qiáng)脂溶性導(dǎo)致其在極性溶劑中溶解性差，難以形成穩(wěn)定的電噴霧（ESI）帶電液滴。其化學(xué)結(jié)構(gòu)缺乏強(qiáng)質(zhì)子化位點(diǎn)，在ESI正離子模式下難以高效生成穩(wěn)定的[M+H]?離子，而更易形成穩(wěn)定性較差的[M+NH?]?加合物，造成質(zhì)譜信號(hào)波動(dòng)，嚴(yán)重影響靈敏度和重現(xiàn)性。
  基質(zhì)抑制顯著：強(qiáng)脂溶性使其易受血漿中共萃取的磷脂干擾，產(chǎn)生強(qiáng)烈的離子抑制效應(yīng)。這不僅大幅降低目標(biāo)分析物信號(hào)（直接影響靈敏度），還可能損害方法的線性范圍、準(zhǔn)確度和精密度。
  2)內(nèi)源性干擾
  內(nèi)源性維生素D代謝物（如維生素D?及其代謝物）與目標(biāo)維生素D類似物（如帕立骨化醇）結(jié)構(gòu)式、分子量都非常接近，從而在色譜柱上保留行為高度相似，極易發(fā)生共洗脫，很難分離，嚴(yán)重影響目標(biāo)化合物定量的特異性和準(zhǔn)確性。
  3)空白基質(zhì)難題
  多數(shù)維生素D類似物屬內(nèi)源性物質(zhì)，無(wú)法使用常規(guī)空白人血漿配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，需使用合適的替代基質(zhì)。方法驗(yàn)證時(shí)需同時(shí)包含替代基質(zhì)和真實(shí)基質(zhì)的質(zhì)控樣品（QC），并必須進(jìn)行平行性實(shí)驗(yàn)。只有平行性實(shí)驗(yàn)通過，才證明替代基質(zhì)適用于定量分析。
  4)穩(wěn)定性問題
  維生素D類似物普遍存在顯著的光不穩(wěn)定問題。因此，從全血采集、樣品前處理、儲(chǔ)存到最終分析的所有環(huán)節(jié)，均須嚴(yán)格避光操作（如使用棕色容器、在黃光環(huán)境下操作），以確保分析物的穩(wěn)定性。
  方法基本信息
  實(shí)驗(yàn)室采用蛋白沉淀或液液萃取前處理方式，找到最佳的流動(dòng)相及色譜柱實(shí)現(xiàn)基質(zhì)干擾分離，已成功開發(fā)出該類物質(zhì)的LC-MSMS檢測(cè)方法，測(cè)定人血漿或血清中維生素D3及其多個(gè)類似物，可以快速高效的完成臨床生物樣品分析檢測(cè)，助力藥物BE研究及臨床PK或其他檢測(cè)研究。其中維生素D3定量下限為0.5 ng/mL，帕立骨化醇、卡泊三醇、艾地骨化醇的定量下限分別為為10、20和10 pg/mL。定量下限的典型圖譜如下：
  維生素D3（定量下限：0.5 ng/mL）
  T(min)
  帕立骨化醇（定量下限：10 pg/mL）
  T(min)
  卡泊三醇（定量下限：20 pg/mL）
  T(min)
  艾地骨化醇（定量下限：10 pg/mL）
  T(min)
  研究經(jīng)驗(yàn)
  維生素D3的方法已經(jīng)成功用于阿侖膦酸鈉維D3片人體BE研究并完成檢測(cè)，帕立骨化醇的方法成功運(yùn)用于帕立骨化醇軟膠囊人體BE研究，卡泊三醇的方法成功運(yùn)用于卡泊三醇倍他米松軟膏人體PK研究并完成申報(bào)資料提交。
  作為國(guó)內(nèi)首批運(yùn)用電子化管理的檢測(cè)單位，湖南科銳斯醫(yī)藥科技有限公司自2020年起在項(xiàng)目管理、物資管理、原始記錄、檔案管理等全面運(yùn)用電子化平臺(tái)開展生物樣本檢測(cè)研究。公司擁有生物樣本分析檢測(cè)、外用制劑體外評(píng)價(jià)、制劑微觀結(jié)構(gòu)解析及輔料反向等系列平臺(tái)，目前已完成近500個(gè)品種的生物樣本檢測(cè)，申報(bào)項(xiàng)目300+項(xiàng)，接受國(guó)家局現(xiàn)場(chǎng)核查近40次且0缺陷通過，70+個(gè)品種免核查。
  公司于2022年取得中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)（CNAS）實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可證書，2024年建立了滿足中美雙報(bào)的中英文體系。
  特色品種
  內(nèi)源性物質(zhì)：熊去氧膽酸、維生素D3及類似物
  外用制劑：洛索洛芬鈉凝膠貼膏、氟比洛芬凝膠貼膏等
  復(fù)方制劑：復(fù)方甘草酸苷等
  體外磷結(jié)合劑：枸櫞酸鐵等
  參考文獻(xiàn)
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